Een mannequin van Experimentele Steatosis In Vitro: hepatocyt Cell Tradition in Lipid Overload-geconditioneerd medium
Metabolische disfunctie-geassocieerde leververvetting (MAFLD), voorheen bekend als niet-alcoholische leververvetting (NAFLD) , is de meest voorkomende leverziekte wereldwijd vanwege de relatie met obesitas, diabetes sort 2 en dyslipidemie. Hepatische steatose, de ophoping van lipidedruppeltjes in het leverparenchym, is een belangrijk kenmerk van de ziekte die voorafgaat aan de ontsteking die wordt waargenomen bij steatohepatitis, fibrose en eindstadium leverziekte. Ophoping van lipiden in hepatocyten kan interfereren met het juiste metabolisme van xenobiotica en endogene moleculen , en kan ook cellulaire processen induceren die leiden tot het voortschrijden van de ziekte.
Hoewel de experimentele studie van steatose in vivo kan worden uitgevoerd , zijn in vitro benaderingen voor de studie van steatose complementaire instrumenten met verschillende voordelen. Hepatocytenkweek in medium met lipidenoverbelasting is een uitstekende reproduceerbare optie voor de studie van leversteatose, waardoor cellulaire processen kunnen worden geïdentificeerd die verband houden met lipidenaccumulatie, zoals oxidatieve en reticulaire stress, autofagie, proliferatie, celdood, enz. testen, waaronder de effectiviteit van geneesmiddelen, en toxicologische testen, naast vele andere mogelijke toepassingen.
Hier was het de bedoeling om de methodologie van hepatocytcelkweek in lipide-overbelasting-geconditioneerd medium te beschrijven. HepG2-cellen werden gekweekt in RMPI 1640-medium, geconditioneerd met natriumpalmitaat en natriumoleaat. Belangrijk is dat de verhouding van deze twee lipiden cruciaal is om de accumulatie van lipidedruppels te bevorderen, terwijl de celproliferatie en een matig sterftecijfer, zoals in de lever tijdens de ziekte , wordt gehandhaafd . De methodologie, van de voorbereiding van de voorraden van de lipideoplossing, het mengsel, de toevoeging aan het medium en de hepatocytcultuur wordt getoond. Met deze benadering is het mogelijk om lipidedruppeltjes in de hepatocyten te identificeren die gemakkelijk waarneembaar zijn door olie-rode O-kleuring , evenals curven van proliferatie/sterftecijfers.
Vergelijking van de Donor Age-Dependent en In Vitro Cultuur -afhankelijk mesenchymale stamcellen Cell Getting old in Rat Mannequin
Klinische experimenten suggereren dat mesenchymale stamcellen (MSC’s) nuttig kunnen zijn voor weefselhersteltherapieën of de behandeling van auto-immuunziekten. Er is nog steeds geen consensus over de leeftijdsgrens van MSC-donoren, de meerderheid van de onderzoekers suggereert autologe MSC-therapieën van patiënten die de leeftijdsgrens van 55-60 jaar niet overschrijden. Het doel van onze studie was om de geselecteerde parameters van MSC’s van vetweefsel (vetstamcel, ASC) te vergelijken, verzameld van jonge en oude ratten van leeftijden die overeenkomen met de leeftijd van 25 jaar van de patiënt. respectievelijk 80 jaar.
De verschillen in parameters van ASC’s van jonge en oude dieren werden vergeleken met de verschillen tussen ASC’s van korte termijn (three passage) en lange termijn (30 passage) in vitro kweek. Celmorfologie, expressie van oppervlaktemarkers, groeipotentieel, metabolische activiteit, β- galactosidase-activiteit, klonogeen potentieel, angiogeen potentieel en differentiatievermogen van ASC’s van jonge en oude dieren en van in vitro- culturen bij 3e en 30e passages werden vergeleken en geanalyseerd.
Er kan worden geconcludeerd dat ASC’s kunnen worden toegepast voor autologe transplantaties bij oudere patiënten. Vergelijking van de ASC-verouderingsdynamiek, afhankelijk van de veroudering van de gastheer of de duur van de in vitro- kweek, suggereert dat een langdurige in vitro- kweek ASC’s meer kan beïnvloeden dan het natuurlijke verouderingsproces van hun gastheer. We stellen voor dat ASC’s die in vitro zijn uitgebreid voordat ze klinisch worden gebruikt , zorgvuldig moeten worden gescreend op de mogelijke verouderingseffecten die niet alleen het gevolg zijn van de leeftijd van de donor, maar ook van de duur van hun in vitro- kweek.
Drug gevoeligheidsprofiel kleine KRAS mutaties in colorectale kanker through combine cultuur assay: Het impact van AMG-510, een nieuwe KRAS G12C selectieve remmer bij darmkanker cellen aanmerkelijk versterkt door het gecombineerde remming van MEK en BCL-XL
Colorectale kanker met een Kirsten-rattensarcoom 2 virale oncogene homoloog (KRAS) genmutatie wordt beschouwd als resistent tegen anti-EGFR-middelen. G12D is de meest voorkomende KRAS-mutatie bij colorectale kanker, gevolgd door G12V en G13D. Volgens klinische en fundamentele onderzoeksgegevens zijn patiënten met colorectale kanker die G12D- en G12V-KRAS- mutaties vertonen resistent tegen anti-EGFR-middelen; dit geldt echter niet voor G13D en andere kleine mutaties, die nog steeds niet goed worden begrepen. De huidige studie richtte zich op kleine KRAS-mutaties (G12A, G12C, G12S, Q61H en A146T) en evalueerde of deze resistent waren tegen anti-EGFR-antilichamen met behulp van een mengcultuurtest. De resultaten toonden aan dat alle KRAS-mutaties, waaronder kleine mutaties, waren resistent tegen twee anti-EGFR-middelen: Cetuximab en panitumumab.
Het gecombineerde impact van MEK- en BCL-XL-remming op colorectale kankercellen met kleine KRAS-mutaties werd vervolgens geëvalueerd. Het gecombineerde impact van MEK- en BCL-XL-remmers werd bevestigd in alle kleine KRAS-mutaties. De gevoeligheid van AMG510, een nieuwe selectieve remmer van KRAS G12C, werd ook beoordeeld. De mixcultuurtest onthulde dat AMG510 selectief een antitumoreffect uitoefende op darmkankercellen met een G12C KRAS-mutatie . De combinatie van MEK- en BCL-XL-remming versterkte het impact van AMG510 in darmkankercellen aanzienlijk. De huidige studie suggereerde dat AMG510 mogelijk klinisch kan worden gebruikt in combinatie met MEK- en BCL-XL-remmers bij de behandeling van patiënten met colorectale kanker die de G12C KRAS-mutatie vertonen.
odium hyaluronaat aangevuld kweek medium gecombineerd met gezamenlijke simuleren mechanische belasting verbetert chondrogene differentiatie van menselijke mesenchymale stamcellen cellen
In vitro modellen zijn bedoeld om de in vivo situatie te recapituleren. Om de omgeving van het kniegewricht beter na te bootsen, hebben de huidige in vitro-modellen verbeteringen nodig om de complexiteit van het oorspronkelijke weefsel weer te geven. Hyaluronan met hoog molecuulgewicht (hMwt HA) is een van de meest voorkomende bioactieve macromoleculen in gezonde synoviale vloeistof, terwijl afschuiving en dynamische compressie twee mechanische krachten zijn die related zijn voor het gewricht. De huidige studie was gericht op het onderzoeken van het gelijktijdige impact van gewrichtssimulerende mechanische belasting (JSML) en hMwt HA-aangevuld kweekmedium op de chondrogene differentiatie van primaire menselijke beenmerg-afgeleide mesenchymale stamcellen (hBM-MSC’s). hBM-MSC-chondrogenese werd gedurende 28 dagen onderzocht op genexpressieniveau en totaal DNA, gesulfateerd glycosaminoglycaan,TGF-β1-productie en safranine O- kleuring werden geëvalueerd.
Het gelijktijdige impact van hMwt HA-kweekmedium en JSML verhoogde de afzetting van kraakbeenachtige matrix en de synthese van gesulfateerde glycosaminoglycaan aanzienlijk, vooral tijdens de vroege chondrogenese. Een stabilisatie van het van hBM-MSC afgeleide chondrocytenfenotype werd waargenomen door de verminderde opregulatie van de hypertrofische marker collageen X en een toename van de chondrogene collageen sort II/X-verhouding . Een combinatie van JSML en hMwt HA-medium weerspiegelt beter de complexiteit van de in vivo synoviale gewrichtsomgeving. JSML en hMwt HA-medium zullen dus twee belangrijke kenmerken zijn voor gewrichtsgerelateerde kweekmodellen om de in vivo uitkomst nauwkeuriger te voorspellen, waardoor de behoefte aan dierstudies wordt verminderd. Het verminderen van in vitro artefacten zou een betrouwbaardere prescreening van potentiële kraakbeenhersteltherapieën mogelijk maken.